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वायरस के लिए टिटर की गणना करना यह कहने का एक जटिल तरीका है कि एक वैज्ञानिक एक विशेष नमूने में वायरस की संख्या की गिनती कर रहा है। वायरस टाइटर्स की गणना करने के लिए, वैज्ञानिक अलग-अलग सांद्रता वाले वायरल समाधानों के साथ बढ़ते बैक्टीरिया की प्लेटों को संक्रमित करते हैं और वायरल संक्रमण के कारण मरने वाले बैक्टीरिया की गिनती करके मूल समाधान में वायरस की संख्या का पता लगाते हैं।
सीरियल दिलवाले
दस्ताने पर रखो, 9 मिलीलीटर शोरबा के साथ 10 संस्कृति ट्यूबों को भरें और उन्हें "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3," और इतने पर "10 ^ -10" लेबल करें। वायरल सीरियल dilutions के लिए इस्तेमाल किया जाएगा फेज टिटर की गणना करने के लिए। चूंकि वायरस अविश्वसनीय रूप से उच्च सांद्रता तक बढ़ सकते हैं, आपको उन्हें प्रभावी ढंग से गिनने के लिए उन्हें पतला करना होगा। प्रत्येक ट्यूब वायरस के दस गुना कमजोर पड़ने का प्रतिनिधित्व करता है।
वायरस संस्कृति का 1 मिलीलीटर लें जिसे आप फेज टिटर की गणना करना चाहते हैं और इसे विंदुक के साथ "10 ^ -1" नामक ट्यूब में स्थानांतरित करना चाहते हैं। ट्यूब को अच्छी तरह मिलाएं। यह आपका पहला दस गुना कमजोर पड़ना है।
अपनी ट्यूब से "10 ^ -1" लेबल वाली मिश्रित संस्कृति के 1 मिलीलीटर लें और इसे "10 ^ -2" लेबल वाले एक नए विंदुक के साथ स्थानांतरित करें, इस ट्यूब को भी मिलाएं।
एक धारावाहिक कमजोर पड़ने की श्रृंखला बनाने के लिए इस पैटर्न को जारी रखें। आप 9 मिलीलीटर की 9 ट्यूब और 10 मिलीलीटर की 1 ट्यूब के साथ समाप्त हो जाएंगे। आपकी नलियों में वायरल लोड 10 गुना (आपकी पहली ट्यूब) या 100 गुना (आपकी दूसरी ट्यूब) से दस बिलियन गुना (आपकी अंतिम ट्यूब) तक कहीं भी पतला हो जाएगा।
टिटर की गणना के लिए प्लेट्स तैयार करना
ट्रिप्टोन सॉफ्ट एगर और 10 पेट्री प्लेट्स की 10 ट्यूब लें और उन्हें अपने सीरियल कमजोर पड़ने वाले ट्यूबों के साथ लेबल करें।
कैप को ढीला करें ताकि वे गर्मी में बंद न हों और फिर अपनी अगर ट्यूबों को उबलते पानी के बीकर में रखें। यह अगर को पिघला देगा ताकि आप इसे पेट्री प्लेट में डाल सकें।
अपनी ट्यूब को न्यूनतम 45 डिग्री सेल्सियस पर गर्म पानी के स्नान सेट पर स्थानांतरित करें। इससे यह सुनिश्चित होगा कि पेट्री डिश में डालने का मौका मिलने से पहले आपका आगर ट्यूबों में जमता नहीं है।
बैक्टीरियल कल्चर की दो बूंदें अपने अगर में डालें और इसे धीरे से मिलाएं। ये वे बैक्टीरिया हैं जिन्हें मार दिया जाएगा, जिससे आप किसी विशेष समाधान में वायरस के कणों की संख्या गिन सकते हैं।
प्रत्येक धारावाहिक कमजोर पड़ने के 1 मिलीलीटर को इसके संबंधित अगर ट्यूब में जोड़ें, जबकि ट्यूब अभी भी गर्म पानी के स्नान में हैं। उदाहरण के लिए, आपके 10 ^ -1 सीरियल कमजोर पड़ने के 1 मिलीलीटर को "10 ^ -1" लेबल वाली अगर ट्यूब में जाना चाहिए।
प्रत्येक ट्यूब को मिलाएं और फिर प्रत्येक ट्यूब को पेट्री प्लेट में संबंधित लेबल के साथ डालें। इससे हर प्लेट में बैक्टीरिया और वायरस से संक्रमित होने वाली अगर की एक पतली परत बनाई जाएगी। इनक्यूबेटर में प्लेटें रातोंरात बढ़ने दें।
वायरस टिटर की गिनती और गणना
अपनी प्लेटों को इनक्यूबेटर से बाहर निकालें और उनकी जांच करें। आपको प्लेटों में बादल वाले क्षेत्रों को देखना चाहिए जहां बैक्टीरिया बड़े हो गए हैं, सिवाय छोटे स्पष्ट धब्बों को छोड़कर जिन्हें प्लाक कहा जाता है। ये पट्टिका मृत बैक्टीरिया के पैच हैं, और प्रत्येक पट्टिका एक वायरस का प्रतिनिधित्व करती है।
एक ऐसी प्लेट ढूंढें जिसमें 30 और 300 सजीले टुकड़े हों और उस प्लेट पर सजीले टुकड़े की सही संख्या गिनें।
अपनी प्लेट पर सजीले टुकड़े की संख्या ले लो और 10 से गुणा करें। यदि आप 157 पट्टिकाएं गिनते हैं, तो आपको 1570 मिलेंगे।
अपने कमजोर पड़ने वाले ट्यूब पर संख्या के व्युत्क्रम से पिछले चरण में प्राप्त संख्या को गुणा करें। उदाहरण के लिए, यदि आपके द्वारा चुनी गई प्लेट 10 ^ -5 प्लेट थी, तो आप 157000000 प्राप्त करने के लिए 1570 को 10 ^ 5 से गुणा करेंगे। यह अंतिम संख्या आपका फेज टिटर है, और आपकी मूल संस्कृति के प्रति मिलीलीटर वायरस की संख्या का प्रतिनिधित्व करता है।