विषय
पश्चिमी सोख्ता जैव रासायनिक प्रयोगशालाओं में सबसे आम प्रक्रियाओं में से एक है। मूल रूप से, यह आकार से प्रोटीन को एक नमूने से अलग करता है, फिर यह निर्धारित करने के लिए एंटीबॉडी का उपयोग करके परीक्षण करता है कि किसी दिए गए प्रोटीन मौजूद हैं या नहीं। न केवल अनुसंधान में बल्कि चिकित्सा या नैदानिक प्रयोगशालाओं में भी यह उपयोगी है; उदाहरण के लिए, एचआईवी और लाइम रोग दोनों के लिए परीक्षण, एक एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसोर्बेंट परख (एलिसा) परीक्षण को शामिल करते हैं, उसके बाद एक पश्चिमी धब्बा यदि एलिसा परीक्षण सकारात्मक है। हालांकि, इसकी लोकप्रियता के बावजूद, पश्चिमी सोख्ता के कई नुकसान हैं।
Nonquantitative
शास्त्रीय पश्चिमी धब्बे निर्विवाद हैं। दूसरे शब्दों में, जबकि वे शोधकर्ताओं को बता सकते हैं कि क्या एक विशेष प्रोटीन मौजूद है, वे यह निर्धारित करना संभव नहीं करते हैं कि प्रोटीन कितना मौजूद है। कुछ बायोटेक कंपनियां अब किट बेचती हैं जो शोधकर्ताओं या लैब तकनीशियनों को एक मानक वक्र का उपयोग करके उपस्थित प्रोटीन की मात्रा निर्धारित करने में सक्षम बनाती हैं - लेकिन यह केवल तभी काम करता है जब उसी प्रोटीन के शुद्ध नमूने उपलब्ध हों। इसके अलावा, एक प्रोटीन के आणविक भार को केवल पश्चिमी ब्लोटिंग के साथ अनुमानित किया जा सकता है, बजाय बड़े पैमाने पर स्पेक्ट्रोमेट्री के साथ सटीक रूप से निर्धारित किया जाता है।
एंटीबॉडी
एक पश्चिमी धब्बा केवल तभी किया जा सकता है जब ब्याज के प्रोटीन के खिलाफ प्राथमिक एंटीबॉडी उपलब्ध हों। जबकि कई अलग-अलग प्रोटीनों के लिए एंटीबॉडी बायोटेक कंपनियों से उपलब्ध हैं, वे सस्ते नहीं हैं; यदि किसी दिए गए प्रोटीन के लिए प्राथमिक एंटीबॉडी उपलब्ध नहीं हैं, तो उस विशेष प्रोटीन की तलाश में पश्चिमी धब्बा प्रदर्शन करना संभव नहीं होगा। इसके अलावा, शोधकर्ता यह निर्धारित करना चाहते हैं कि क्या प्रोटीन को किसी तरह से संशोधित किया गया है - यदि इसे फॉस्फोराइलेट किया गया है (इसके साथ एक फॉस्फेट समूह जुड़ा हुआ है), उदाहरण के लिए - और पश्चिमी धब्बा तकनीक के साथ उन्हें संशोधित एंटीबॉडी की आवश्यकता होती है प्रोटीन।
प्रशिक्षण
पश्चिमी धब्बा को ठीक से करना और अच्छे परिणाम प्राप्त करना चुनौतीपूर्ण हो सकता है, इसलिए कर्मचारियों को अच्छी तरह से प्रशिक्षित होना चाहिए।इस रूप में बहुत अधिक के रूप में, अनुभव शायद सबसे अच्छा ट्यूटर है; एक अनुभवी तकनीशियन के लिए भी, हालांकि, एक पश्चिमी धब्बा समय लेने वाला है। उदाहरण के लिए, जेल वैद्युतकणसंचलन भाग, आमतौर पर एक से दो घंटे तक चलने में ले जाएगा। जेल चलाने के दौरान अन्य कार्य किए जा सकते हैं, बेशक, लेकिन परिणाम प्राप्त करने में अभी भी काफी समय लगता है।
अन्य सीमाएँ
एंटीबॉडी कभी-कभी कुछ ऑफ-टारगेट बाइंडिंग दिखा सकते हैं, जो खराब परिणामों के लिए बना सकते हैं। इसके अलावा, पश्चिमी सोख्ता के साथ, आप एक विशिष्ट प्रोटीन के खिलाफ एंटीबॉडी का उपयोग करते हैं, इसलिए आपके परिणाम केवल आपको बताएंगे कि क्या प्रोटीन मौजूद था। उच्च-रिज़ॉल्यूशन द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमेट्री, इसके विपरीत, एक नमूने में मौजूद सभी प्रोटीनों को प्रकट करता है, और शास्त्रीय पश्चिमी सोख्ता के विपरीत यह मात्रात्मक है। निश्चित रूप से यह याद रखना महत्वपूर्ण है, कि वेस्टर्न ब्लॉटिंग की तुलना में मास स्पेक्ट्रोमेट्री बहुत अधिक महंगी है और तकनीकी रूप से अधिक चुनौतीपूर्ण है।