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एक नमूने में रोगाणुओं की एकाग्रता का निर्धारण करने के लिए क्लासिक तरीकों में से एक नमूना पतला करना है, प्लेटों पर रोगाणुओं को बढ़ाना और कालोनियों की गणना करना है। मढ़वाया रोगाणुओं एक कॉलोनी बनाने इकाई से एक या अधिक कोशिकाओं से मिलकर एक दृश्य कॉलोनी में विकसित होता है जिसे देखा और गिना जा सकता है। प्लेट काउंट्स का उपयोग कर आकलन करने के लिए बैक्टीरिया सबसे आम माइक्रोब हैं। मिट्टी, पानी और भोजन में रोगाणुओं का पता लगाने और गिनने के लिए कॉलोनी की गिनती का उपयोग किया जाता है। कालोनियों की गिनती के लिए प्रोटोकॉल एक सटीक और पद्धतिगत दृष्टिकोण पर जोर देते हैं।
पतला करने के नमूने, चढ़ाना और ऊष्मायन
यदि आप बस एक अगर प्लेट पर एक माइक्रोएब नमूना स्मीयर करते हैं, तो आप बहुत से कॉलोनी बनाने वाली इकाइयां देखेंगे जो व्यक्तिगत कॉलोनियों को एक साथ मिलाएंगे, जिससे उन्हें गिनना असंभव होगा। इस समस्या को हल करने के लिए, नमूने को एक तरल माध्यम में मिलाएं, उस मिश्रण की थोड़ी मात्रा लें और इसे और पतला करें। इस प्रक्रिया को छह से 10 बार दोहराएं। यदि आप कालोनियों की गिनती करते हैं, तो एक एगर प्लेट पर अंतिम फैलाव फैलाएं और इसे चार से सात दिनों के लिए सेते हैं।
मैनुअल गिनती
कॉलोनियों की गिनती में प्राथमिक चाल प्रत्येक कॉलोनी डॉट को एक बार गिनना है। एक दृष्टिकोण पेट्री डिश को एक ग्रिड पृष्ठभूमि पर सेट करना और प्रत्येक ग्रिड सेल में कॉलोनियों की गणना करना है, सभी कोशिकाओं के माध्यम से एक व्यवस्थित पैटर्न में चल रहा है। पेट्री डिश की पीठ पर गिने कॉलोनियों को चिह्नित करना भी एक सहायक दृष्टिकोण हो सकता है। आम तौर पर, आपको कम से कम तीन प्लेटों की गिनती करने की आवश्यकता होगी; केवल 30 से 300 कॉलोनियों वाली प्लेटों का उपयोग करें जिससे मजबूत इंफ़ॉर्मेंस मिलें, माइक्रोबायोलॉजी नेटवर्क का सुझाव है, एक फर्म जो लैब और निर्माताओं को परामर्श सेवाएं प्रदान करती है। कालोनियों के साथ प्लेट्स जो गिनती के लिए बहुत अधिक हैं या बहुत कम कालोनियों के साथ एक नए कमजोर पड़ने से फिर से चढ़ाने की आवश्यकता है।
स्वचालित गणना
मानव त्रुटि मैन्युअल रूप से कालोनियों की गिनती में शामिल समय को जोड़ती है। सटीकता और दक्षता दोनों में सुधार करने के लिए, पेट्री डिश को एक स्वचालित कॉलोनी गिनती डिवाइस में रखें। स्वचालित कॉलोनी काउंटर डिश की एक छवि लेते हैं, कॉलोनियों को पृष्ठभूमि से अलग करते हैं और फिर प्लेट पर कॉलोनियों को गिनने के लिए एक एल्गोरिथ्म का उपयोग करते हैं। दो या दो से अधिक कॉलोनियों को किनारों पर छूते समय एल्गोरिदम को कॉलोनियों को अलग करने में कठिनाई हो सकती है, इसलिए यह चल रहे सॉफ़्टवेयर विकास का एक क्षेत्र है।
अधिक जटिल गणना करना
कॉलोनी गणना से माइक्रोब घनत्व की गणना की सटीकता में कुछ सीमाएं हैं। कॉलोनी बनाने वाली इकाइयाँ एकल कोशिका, कोशिकाओं की एक श्रृंखला या कोशिकाओं का एक पूरा समूह हो सकती हैं। धारणा यह है कि एक कॉलोनी एक सेल का प्रतिनिधित्व करती है, इसलिए कॉलोनी की गणना से सांद्रता कम हो सकती है। विभिन्न रोगाणुओं को अलग-अलग विकास की स्थिति की आवश्यकता होती है, और प्लेट पर उपनिवेश केवल उन रोगाणुओं का प्रतिनिधित्व करते हैं जो उन ऊष्मायन स्थितियों के तहत उस विकास मीडिया पर पनपते हैं। इसके अलावा, कॉलोनी-काउंटिंग मृत कोशिकाओं को पंजीकृत नहीं करती है, जब आपको मूल नमूने में कोशिकाओं की एकाग्रता की आवश्यकता होती है, तो एक महत्वपूर्ण विचार।