विषय
पराबैंगनी प्रकाश (यूवी) के अपने अवशोषण को मापकर अपने आरएनए नमूने को परिमाणित करें। एक नैनो-ड्रॉप स्पेक्ट्रोफोटोमीटर आपके नमूने के केवल एक या दो माइक्रोलिटर का उपयोग करेगा, जिसे आप पुनर्प्राप्त कर सकते हैं। अन्य स्पेक्ट्रोफोटोमीटर को बहुत बड़े नमूने की आवश्यकता होती है। एक 1 सेमी प्रकाश पथ में 260nm के यूवी तरंग दैर्ध्य पर न्यूक्लियोटाइड के लिए विलुप्त होने का गुणांक 20 है। इस विलुप्त होने वाले गुणांक के आधार पर, 40µg / ml RNA का एक ही परिस्थितियों में अवशोषण एक है। इस जानकारी का उपयोग करके, आप अपने आरएनए नमूने की एकाग्रता की गणना कर सकते हैं।
अपने नमूने के लिए, यदि आवश्यक हो तो एक कमजोर पड़ने बनाओ। एक microcuvette के लिए एक मानक कमजोर पड़ने 1:40 है। 78 sterL बाँझ पानी में 2µL RNA नमूना जोड़कर इसे कमजोर करें।
रिक्त का उपयोग करके मशीन को जांचने के लिए अपने विशेष स्पेक्ट्रोफोटोमीटर के प्रोटोकॉल का पालन करें और फिर 260nm के यूवी तरंग दैर्ध्य पर अपने नमूने के ऑप्टिकल घनत्व का निर्धारण करें।
40μg RNA / mL द्वारा अपने कमजोर पड़ने वाले कारक द्वारा अपने नमूने के अवशोषण को गुणा करें। समीकरण होगा: "आरएनए एकाग्रता (mlg / ml) = (OD260) x (कमजोर पड़ने का कारक) x (40 /g RNA / ml) / (1 OD260 इकाई)" (Hofstra.edu) उदाहरण के लिए: यदि आपने अपना नमूना पतला किया है 1:40 और आपकी अब्सॉर्बेंस रीडिंग 0.08 थी, आप 0.08 x 40 x 40 = 128 /g / ml = 0.13 anceg / μL गुणा करेंगे
280nm यूवी तरंगदैर्ध्य पर एक और अवशोषण रीडिंग लेकर अपने नमूने की शुद्धता का पता लगाएं। आयुध डिपो 260 / OD 280 यह इंगित करेगा कि क्या - और किस स्तर पर - आपका नमूना प्रोटीन या फिनोल से दूषित है। 1.8 से 2.0 का परिणाम गुणवत्ता आरएनए को इंगित करता है।