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एक समाधान में स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग कुछ यौगिकों, जैसे प्रोटीन, की एकाग्रता को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। सामान्य तौर पर, एक प्रकाश एक नमूने से भरे क्यूवेट के माध्यम से चमकता है। नमूना द्वारा अवशोषित प्रकाश की मात्रा को मापा जाता है। चूंकि यौगिक विभिन्न वर्णक्रमीय श्रेणियों में प्रकाश को अवशोषित करते हैं, इसलिए विश्लेषण के लिए सही तरंग दैर्ध्य निर्धारित किया जाना चाहिए। स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री के माध्यम से अज्ञात नमूनों की एकाग्रता की गणना करने के कई तरीके हैं, हालांकि संदर्भ मानकों का उपयोग करना सर्वोत्तम सटीकता देता है। इसके अलावा, मानकों से यह भी पता चलता है कि अगर स्पेक्ट्रोफोटोमीटर विश्लेषण में खराबी या अन्य समस्याएं हैं।
सीधी रेखा के समीकरणों के माध्यम से गणना करना
विश्लेषण की शुरुआत में संदर्भ मानकों का विश्लेषण करें। मानकों को सांद्रता कहा जाता है और उपकरणों को जांचने और सटीकता की जांच करने के लिए उपयोग किया जाता है। सभी नमूने मानकों की कार्य सीमा के भीतर होने चाहिए। यदि नहीं, तो नमूनों को पतला करना होगा या मानकों की एकाग्रता में वृद्धि होगी।
मानक एकाग्रता और शोषक रीडिंग के साथ एक स्कैटर चार्ट या लाइन ग्राफ बनाएं। एकाग्रता y- अक्ष पर होगी, x- अक्ष पर शोषक। उदाहरण के लिए, मानक 1 पीपीएम, 2.5 पीपीएम और 5 पीपीएम हैं। दी गई अवशोषकता 1 पीपीएम = .25, 2.5 पीपीएम = .5, और 5 पीपीएम = .75 है।
ग्राफ पर एक समीकरण प्रदर्शित करने के लिए ट्रेंड लाइन को प्रारूपित करें। समीकरण सूत्र y = mx + b दिखाएगा। उदाहरण के लिए, चरण 2 में मानकों का उपयोग करते हुए समीकरण y = .1224x + 0.1531 है। अधिकांश ट्रेंड लाइनों को शून्य पर इंटरसेप्ट किया जाता है, लेकिन यह विश्लेषणात्मक विधि और आर-स्क्वेर्ड वैल्यू पर निर्भर करता है।
अज्ञात नमूनों और रिकॉर्ड अवशोषक रीडिंग का विश्लेषण करें।
नमूनों की एकाग्रता का निर्धारण करने के लिए समीकरण (y = mx + b) का उपयोग करें।
सीधी रेखा के समीकरण को समझना
"Y" को एकाग्रता के बराबर करें। यह वह है जिसके लिए हल किया जाएगा।
"X" को नमूने की अवशोषकता के बराबर होने दें। यह स्पेक्ट्रोफोटोमीटर द्वारा मापी गई अवशोषक है।
ढलान के बराबर और "बी" को वाई-इंटरसेप्ट के बराबर करने की अनुमति दें। दोनों दिए गए हैं, हालांकि अगर ट्रेंड लाइन 0 के माध्यम से मजबूर किया गया था, तो "बी" 0 होगा।
एकाग्रता के लिए हल करें। चरण 3 में उदाहरण का उपयोग करते हुए .563 की दी गई अवशोषितता के रूप में "x" को प्रतिस्थापित करें। इसलिए:
y = .1224 (.563) + 0.1531
y (एकाग्रता) = .222011