विषय
जीवाणु संस्कृतियों के जनसंख्या घनत्व की गणना के लिए वैज्ञानिक धारावाहिक dilutions (1:10 dilutions की एक श्रृंखला) का उपयोग करते हैं। जब कम संख्या में बैक्टीरिया युक्त संस्कृति की एक बूंद को चढ़ाया जाता है और ऊष्मायन किया जाता है, तो प्रत्येक कोशिका सैद्धांतिक रूप से अन्य कोशिकाओं से काफी दूर होगी कि वह अपनी कॉलोनी बनाएगी। (वास्तव में, कुछ उपनिवेश दो पास की कोशिकाओं के वंशज हो सकते हैं, लेकिन यह पतला संस्कृतियों में दुर्लभ है, और इसलिए कॉलोनियों की संख्या मूल रूप से प्लेट में स्थानांतरित कोशिकाओं की संख्या का बहुत अच्छा अनुमान है।) क्योंकि जनसंख्या घनत्व है। अज्ञात, विभिन्न प्रकार की dilutions का उपयोग उचित संख्या में कालोनियों के साथ एक प्लेट को समाप्त करने के लिए किया जाना चाहिए।
सीरियल दिलवाले
1 के रूप में 6 के रूप में छह टेस्ट ट्यूब (विकास मीडिया के प्रत्येक युक्त 9 एमएल) लेबल। 6 के माध्यम से छह अगर प्लेटों को लेबल करें। 6. एक पिपेटेटर और बाँझ 1 मिलीलीटर (एमएल) पिपेट युक्तियों का उपयोग करके ट्यूब में 1 एमएल जीवाणु संस्कृति को स्थानांतरित करें। 1।
अच्छी तरह से मिलाएं और एक पाइप लाइनर और बाँझ 1 एमएल युक्तियों का उपयोग करके ट्यूब 1 से ट्यूब 2 में 1 एमएल स्थानांतरण करें।
शेष ट्यूबों के लिए चरण 2 को दोहराएं, प्रत्येक बार सबसे हाल ही में प्रयुक्त ट्यूब से 1 एमएल को अगली ट्यूब में स्थानांतरित करें।
ट्यूब 1 से एक अगर प्लेट में 0.1 एमएल स्थानांतरित करने के लिए एक पिपेटेटर और बाँझ 0.1 एमएल युक्तियों का उपयोग करें। एक एल के आकार की कांच की छड़ को जलाएं और इसे प्लेट के चारों ओर समान रूप से ड्रॉप फैलाने के लिए उपयोग करें। इस्तेमाल किए जा रहे बैक्टीरिया के लिए उचित तापमान पर 48 घंटे के लिए प्लेट सेते हैं। विभिन्न प्रकार के बैक्टीरिया में अलग-अलग इष्टतम विकास तापमान होते हैं। यदि आपको संदर्भ सामग्री का उपयोग करके इष्टतम विकास तापमान नहीं मिल रहा है, तो प्लेटों को 25 और 37 डिग्री पर सेते हुए देखें।
चरण 4 को दोहराएं, प्रत्येक बार अपनी संबंधित प्लेट पर एक अलग टेस्ट ट्यूब से तरल स्थानांतरित करें।
जनसंख्या की गणना
छह प्लेटों का निरीक्षण करें और 30 से 200 पृथक कॉलोनियों के साथ एक को चुनें।
इस्तेमाल की जाने वाली कमजोर पड़ने वाली ट्यूब से संस्कृति की प्रति एमएल कोशिकाओं की संख्या की गणना करने के लिए प्लेट पर कॉलोनियों की संख्या को 10 से गुणा करें।
मूल संस्कृति के प्रति एमएल कोशिकाओं की संख्या की गणना करने के लिए चरण 2 से संख्या 10 ^ (प्लेट संख्या) गुणा करें। 10 ^ (प्लेट नंबर) का मान उस प्लेट को निर्दोष करने के लिए उपयोग की जाने वाली संस्कृति का कमजोर कारक है।