विषय
- बफ़र्स कैसे काम करते हैं
- एक बफर की आवश्यकताएं
- एक अपोजिट बफर का चयन करना
- कैसे एक बफर के पीएच को बदलने के लिए
- जैविक बफ़र्स के उदाहरण
कोशिकाओं और जीवित जीवों में, कोशिकाओं के आसपास और भीतर तरल पदार्थ एक निरंतर पीएच में रखा जाता है। जीव के भीतर होने वाली जैव रासायनिक प्रतिक्रियाओं के लिए इस प्रणाली के भीतर पीएच अक्सर महत्वपूर्ण होता है। प्रयोगशाला में जैविक प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए, वैज्ञानिक प्रयोग के दौरान सही पीएच को बनाए रखने के लिए बफर का उपयोग करते हैं। कई जैविक बफ़र मूल रूप से 1966 में गुड और सहकर्मियों द्वारा वर्णित किए गए थे और आज भी प्रयोगशालाओं में उपयोग किए जाते हैं।
बफ़र्स कैसे काम करते हैं
एक बफर बस एक कमजोर एसिड और इसके संयुग्मित आधार वाला एक समाधान है। जब बफर में एक एसिड जोड़ा जाता है, तो यह संयुग्म आधार के साथ एक कमजोर एसिड बनाता है और शायद ही समाधान के पीएच को प्रभावित करता है।
एक बफर की आवश्यकताएं
कई विशेषताएं जैविक बफर को प्रभावी बनाती हैं। उन्हें पानी में घुलनशील होना चाहिए, लेकिन कार्बनिक सॉल्वैंट्स में घुलनशील या न्यूनतम रूप से घुलनशील नहीं होना चाहिए। बफर सेल झिल्ली से गुजरने में सक्षम नहीं होना चाहिए, क्योंकि यह सेल व्यवहार को प्रभावित कर सकता है। बफर गैर विषैले होने चाहिए, यूवी विकिरण को अवशोषित नहीं करना चाहिए और प्रयोगात्मक प्रक्रिया के दौरान निष्क्रिय और स्थिर रहना चाहिए। तापमान और आयनिक संरचना को पीएच या बफरिंग क्षमता में परिवर्तन नहीं करना चाहिए।
एक अपोजिट बफर का चयन करना
चुने हुए बफर में अध्ययन के तहत प्रक्रिया के लिए इष्टतम रेंज में पीकेए होना चाहिए। प्रयोग के दौरान पीएच में वृद्धि होने की संभावना है, और इसके विपरीत अगर पीएच गिरने की आशंका है, तो उच्च पीकेए के साथ एक बफर उपयुक्त है। बफर सांद्रता को अनुकूलित किया जाना चाहिए, क्योंकि 25mM से अधिक सांद्रता में बेहतर बफरिंग क्षमता हो सकती है लेकिन सेलुलर गतिविधियों जैसे एंजाइम को रोक सकती है। विधि यह भी बताती है कि किस बफर का उपयोग करना है; उदाहरण के लिए, वैद्युतकणसंचलन में, जेल आयन को गर्म होने से रोकने के लिए कम आयनिक ताकत वाला एक बफर उपयुक्त होता है।
कैसे एक बफर के पीएच को बदलने के लिए
क्योंकि पीएच तापमान परिवर्तन के साथ बदल सकता है, वैज्ञानिकों को उन तापमानों पर पीएच का परीक्षण करना चाहिए, जिस पर वे प्रयोग करेंगे। तापमान के साथ पीएच में परिवर्तन के लिए अतिसंवेदनशील एक ट्रिस एक बफर है। सभी पीएच मीटर को काम के तापमान पर कैलिब्रेट किया जाना चाहिए। एडिटिव्स पीएच को भी बदल सकते हैं, जिससे रिटायरिंग आवश्यक हो जाती है। पीएच को बदलने के लिए एक एसिड, आमतौर पर हाइड्रोक्लोरिक एसिड, या बेस, आमतौर पर सोडियम या पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड जोड़ा जाता है; यह बफर में निष्क्रियता या रासायनिक परिवर्तनों को रोकने के लिए धीरे-धीरे किया जाना चाहिए।
जैविक बफ़र्स के उदाहरण
टीई बफर, जो 10 मिमी ट्रिस · एचसीएल और 1 मिमी ईडीटीए है, न्यूक्लिक एसिड के भंडारण के लिए पीएच मानों की संख्या पर उपयुक्त है। इलेक्ट्रोफोरोसिस प्रोटीन या न्यूक्लिक एसिड के अध्ययन के लिए एक आम तरीका है; यह प्रक्रिया कई बफ़र्स का उपयोग करती है, जिसमें ट्रिस-एसीटेट-ईडीटीए, ट्रिस-ग्लाइसिन और ट्रिस-बोरेट-ईडीटीए बफ़र्स शामिल हैं। ये बफ़र जेल मैट्रिक्स को गर्म करने से रोकते हैं और जांच के आधार पर इसमें यूरिया और एसडीएस जैसे एडिटिव्स हो सकते हैं।