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डीएनए
डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन। डीएनए को जीन नामक इकाइयों में व्यवस्थित किया जाता है, जिनमें से प्रत्येक एक विशेष आरएनए या प्रोटीन अनुक्रम के लिए कोड होते हैं। जैविक संरचना और कार्य, विकास, बीमारी और जीवित प्रणालियों के कई अन्य पहलुओं के बारे में जानने के लिए जीनों का अध्ययन किया जाता है। जीन का विस्तार से अध्ययन करने के लिए, डीएनए को ब्याज की कोशिकाओं से अलग और शुद्ध किया जाना चाहिए।
डीएनए निष्कर्षण
हालांकि एक एकल कोशिका से डीएनए को निकाला जा सकता है और इसका अध्ययन किया जा सकता है, लेकिन यह नंगी आंखों से देखने के लिए पर्याप्त नहीं है। स्पूलिंग के लिए पर्याप्त मात्रा प्राप्त करने के लिए, आपको बेहतर (कई लाखों) के साथ काम करना होगा।
विशिष्ट नमूनों की विशिष्ट विशेषताओं के लिए सटीक प्रोटोकॉल अलग-अलग होते हैं, लेकिन सामान्य चरण होमोजिनाइजेशन, लसीका, पाचन, पृथक्करण और संग्रह हैं। प्रक्रिया को एक छोटे से (नमूने के आकार के आधार पर) ग्लास या प्लास्टिक ट्यूब पर किया जाता है।
एक नमूना आम तौर पर एक दूसरे से कोशिकाओं को पूरी तरह से अलग करने के लिए मिश्रित या जमीन-अप होता है। यह कोशिका अवयवों का अनुसरण करने वाले अभिकर्मकों के लिए अधिक सुलभ बनाता है। डीएनए को मुक्त करने के लिए कोशिका झिल्लियों (और यदि कोशिकाएं यूकेरियोटिक हैं तो परमाणु झिल्ली) को ढंकने के लिए डिटर्जेंट या एंजाइमों को फिर से होमोजेनेट में जोड़ा जाता है। इस बिंदु पर, डीएनए प्रोटीन, लिपिड, कार्बोहाइड्रेट से घिरा हुआ है --- बाकी सब कुछ जो कोशिकाओं में निहित था।
प्रोटीन को तोड़ने के लिए एक और एंजाइमैटिक पाचन आवश्यक हो सकता है ताकि वे डीएनए से न बंधें और इसके संग्रह में बाधा उत्पन्न हो। कोल्ड, प्योर, एथिल या आइसोप्रोपिल अल्कोहल को मिलाकर डीएनए को बाकी सेल सामग्रियों से अलग किया जाता है। इन अल्कोहल में डीएनए घुलनशील नहीं होता है इसलिए यह अल्कोहल के साथ अपने संपर्क को कम करने की कोशिश करेगा। संघनित डीएनए तब एकत्रित होता है, आमतौर पर सेंट्रीफ्यूजेशन --- या स्पूलिंग द्वारा।
डीएनए स्पूलिंग
स्पूलिंग द्वारा डीएनए संग्रह प्रभावी है जब डीएनए की एक बड़ी मात्रा एक निष्कर्षण प्रक्रिया से प्राप्त की जाती है। यह एक उत्कृष्ट प्रदर्शन विधि भी है क्योंकि शुद्ध डीएनए की एक प्रभावशाली उलझन स्पष्ट रूप से दिखाई देती है।
डीएनए को स्पूल करने के लिए पृथक्करण कदम को सावधानीपूर्वक पूरा करना चाहिए। यदि यह पहले जोड़ा गया lysis अभिकर्मक मिश्रण का एक हिस्सा नहीं था, तो शराब के अतिरिक्त कदम से पहले एक केंद्रित नमक समाधान (सोडियम क्लोराइड) को समाधान में जोड़ा जाना चाहिए। मिश्रण से बचने के लिए, जलीय घोल के ऊपर एक परत बनाने के लिए ठंडी शराब को धीरे-धीरे टेस्ट ट्यूब के किनारे डाला जाता है। यदि सही ढंग से किया जाता है, तो शराब नमकीन परत के ऊपर अपनी परत बनाएगी। फिर स्पूलिंग आती है।
नमकीन परत से डीएनए को इकट्ठा करने के लिए, ध्यान से एक ग्लास हलचल रॉड रखें, हालांकि शराब की परत ट्यूब के नीचे तक छूती है। दो परतों के बीच इंटरफ़ेस को देखते हुए, उंगलियों के बीच रॉड को धीरे-धीरे घुमाएं। यदि पर्याप्त डीएनए मौजूद है, तो यह परतों के बीच इंटरफेस में एक दुधारू पारभासी द्रव्यमान बनाने के लिए एक साथ टकराएगा। इसके चारों ओर डीएनए लपेटने के लिए रॉड को घुमाएं (यह स्पूलिंग भाग है) और इसे ट्यूब से बाहर खींचें। भंडारण या आगे के विश्लेषण के लिए डीएनए को शुद्ध शराब की एक और ट्यूब में स्थानांतरित किया जा सकता है।