डीएनए विश्लेषण में प्रयुक्त रसायन

विषय

• डीएनए शुद्धिकरण के लिए एथिलेंडीमिनेटरेटेसेटेट
• डीएनए प्रवर्धन के लिए मैग्नीसिस क्लोराइड
• डीएनए धुंधला के लिए एथिडियम ब्रोमाइड

डीएनए के विश्लेषण में विभिन्न प्रकार के आणविक प्रयोग और जैविक प्रक्रियाएं शामिल हैं। डीएनए एक नाजुक और जटिल कच्चा माल है, इसलिए इसे संभालने और विश्लेषण करने के लिए रसायनों की सर्वोत्तम गुणवत्ता और शुद्धतम तैयारी की आवश्यकता होती है। विश्लेषण के आधार पर, अम्लीय और बुनियादी समाधान से लेकर बफ़र्स और रंजक तक सैकड़ों रसायन डीएनए के अध्ययन में शामिल हैं। यह समझना कि क्यों कुछ रसायनों का उपयोग किया जाता है, सफल प्रयोगों को करने और सटीक, विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण है।

डीएनए शुद्धिकरण के लिए एथिलेंडीमिनेटरेटेसेटेट

वैज्ञानिक कार्य के लिए तीन प्रकार के डीएनए को शुद्ध किया जाता है: जीनोम (जीनोमिक डीएनए) से डीएनए, सेल से संपूर्ण डीएनए (कुल डीएनए) या प्लास्मिड से, जो स्वयं गुणा कर सकते हैं। कुल सेल डीएनए शुद्धिकरण रसायनों का उपयोग करता है जो सेल लसीका के दौरान कई कोशिकाओं के विनाश की अनुमति देता है। रासायनिक ethylenediaminetetraacetate (EDTA) का उपयोग अक्सर मैग्नीशियम आयनों को दूर करने के लिए किया जाता है, जो सेल की दीवारों की कठोरता को बनाए रखने के लिए आवश्यक होते हैं, जिससे ये इस बिंदु पर कमजोर हो जाते हैं कि वे पतन या आंसू करते हैं, विश्लेषण के लिए कोशिकाओं की सामग्री और डीएनए को जारी करते हैं। इसके अलावा, EDTA कोशिका में आम तौर पर मौजूद एंजाइमों को रोककर डीएनए की अखंडता की सुरक्षा और संरक्षण करता है, जो डीएनए को टुकड़े टुकड़े कर सकता है और इसे अनुपयोगी बना सकता है।

डीएनए प्रवर्धन के लिए मैग्नीसिस क्लोराइड

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) एक परिष्कृत विश्लेषण विधि है जिसका उपयोग डीएनए अणु की कई हज़ार प्रतियों को बढ़ाने के लिए किया जाता है, हालाँकि, यह तकनीकी समस्याओं और अशुद्धियों से भरा होता है। कई वैज्ञानिक, इसलिए, विशेष रूप से ब्याज के जीन के लिए सबसे इष्टतम स्थिति और मापदंडों को खोजने के लिए नियमित रूप से पीसीआर के कई अलग-अलग सेट करते हैं। इस तरह के अनुकूलन को करने के लिए इस्तेमाल किया जाने वाला एक रसायन मैग्नीशियम है, जो पीसीआर में उपयोग किए जाने वाले डीएनए पोलीमरेज़ एंजाइम को स्थिर करता है और एंजाइम की गतिविधि के लिए एक आवश्यक सह-कारक के रूप में कार्य करता है। पीसीआर के लिए, मैग्नीशियम का उपयोग मैग्नीशियम क्लोराइड बफर के रूप में किया जाता है।

डीएनए धुंधला के लिए एथिडियम ब्रोमाइड

एथिडियम ब्रोमाइड एक डाई है जो न्यूक्लियोटाइड के बीच फिसलकर डीएनए को बांधता है जो एक प्रक्रिया में डीएनए डबल हेलिक्स बनाता है जिसे इंटरकलेशन के रूप में जाना जाता है। इस डाई को तब एक पराबैंगनी दीपक के साथ रोशन किया जा सकता है, ताकि जिस डीएनए में एथिडियम ब्रोमाइड को बाध्य किया गया है, उसकी कल्पना की जा सके। हालांकि, एथिडियम ब्रोमाइड को ठीक से देखने के लिए कम से कम 1 नैनो डीएनए की आवश्यकता होती है, इसलिए, यह पीसीआर प्रवर्धित डीएनए का पता लगाने का एक तरीका है। हालांकि सस्ता और व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाता है, यह कैंसर पैदा करने के लिए जाना जाने वाला एक उत्परिवर्ती रसायन भी है, इसलिए प्रयोगशालाओं में इसका उपयोग अत्यधिक विनियमित है और कई वैज्ञानिक कम विषाक्त विकल्पों का उपयोग करने के लिए आगे बढ़ रहे हैं।