डीएनए फ्रेगमेंट की लंबाई की गणना कैसे करें

विषय

• कैसे जेल वैद्युतकणसंचलन काम करता है
• एक बुनियादी वैद्युतकणसंचलन प्रक्रिया
• अज्ञात फ़्रैगमेंट की लंबाई निर्धारित करना

जब डीएनए के टुकड़ों की लंबाई को मापने की बात आती है, जो कोशिकाओं की तुलना में बहुत छोटे होते हैं, तो माइक्रोबायोलॉजिस्ट को एक चाल की आवश्यकता होती है, और सबसे सुविधाजनक एक जेल वैद्युतकणसंचलन है। यह विधि इस तथ्य पर निर्भर करती है कि डीएनए के टुकड़े चार्ज किए जाते हैं, और यह अधिक महंगी विधियों का विकल्प है, जैसे कि एक्स-रे क्रिस्टलोग्राफी, जो डीएनए के डबल-हेलिक्स संरचना की खोज के लिए जिम्मेदार था।

कैसे जेल वैद्युतकणसंचलन काम करता है

क्योंकि डीएनए अणुओं को चार्ज किया जाता है, वे एक विद्युत प्रवाह से प्रभावित होते हैं। जब आप उन्हें एक तटस्थ जेल में सेट करते हैं और जेल में एक करंट लगाते हैं, तो अणु सकारात्मक इलेक्ट्रोड (एनोड) की ओर चले जाते हैं। क्योंकि विभिन्न आकारों के डीएनए अणु एक ही चार्ज करते हैं, इसलिए छोटे तेजी से यात्रा करते हैं, इसलिए यह प्रक्रिया अणुओं को उन बैंडों में अलग करती है जिनकी तुलना ज्ञात आकारों के नमूनों से की जा सकती है।

एक बुनियादी वैद्युतकणसंचलन प्रक्रिया

जेल आमतौर पर एग्रोसे, एक पॉलीसेकेराइड से बनाया जाता है जो बफर समाधान में गर्म होने पर एक अर्ध-ठोस, थोड़ा छिद्रित जेल बनाता है। एक छोर पर, जेल कुओं को बनाता है जिसे कुओं कहा जाता है जहां शोधकर्ता डीएनए नमूनों को अध्ययन के तहत रखता है, साथ ही ज्ञात लंबाई के संदर्भ नमूनों के साथ, डीएनए सीढ़ी कहा जाता है। सीढ़ी के टुकड़ों की लंबाई एक और विधि द्वारा निर्धारित की गई है, जैसे कि एक्स-रे क्रिस्टलोग्राफी।

जब जेल को एक संचालन समाधान में डुबोया जाता है और वोल्टेज लगाया जाता है, तो टुकड़े जेल के माध्यम से पलायन करने लगते हैं - पहले वाले छोटे और पीछे वाले बड़े, धीमे। वे अंततः आकार के अनुसार स्पेक्ट्रम-जैसे बैंड में खुद को बनाते हैं।

एक बार ऐसा होने पर, शोधकर्ता बिजली बंद कर देता है, एक डीवीए-बाध्यकारी डाई के साथ जेल को संक्रमित करता है और पराबैंगनी प्रकाश के तहत नमूनों की जांच करता है। एक संदर्भ के रूप में सीढ़ी का उपयोग करते हुए, शोधकर्ता एक दृश्य बैंड में प्रत्येक टुकड़े के आकार को निर्धारित कर सकता है। केवल बैंड दिखाई दे रहे हैं - व्यक्तिगत डीएनए टुकड़े देखने में बहुत छोटे हैं।

अज्ञात फ़्रैगमेंट की लंबाई निर्धारित करना

संभावना सीढ़ी पर एक बैंड के साथ एक नमूना जोड़े में हर बैंड नहीं है, इसलिए इन अज्ञात टुकड़ों के आकार को निर्धारित करने के लिए, वैज्ञानिक आमतौर पर एक ग्राफ की साजिश करते हैं। X- अक्ष पर मिलीमीटर में सीढ़ी में प्रत्येक बैंड द्वारा तय की गई दूरी है, जबकि y- अक्ष पर प्रत्येक बैंड का आकार है। जब बिंदु एक वक्र से जुड़े होते हैं, तो किसी भी बैंड के आकार को मिलीमीटर में उस बैंड द्वारा तय की गई दूरी को मापने के बाद वक्र से एक्सट्रपलेशन किया जा सकता है।