विषय
बायोकेमिस्ट्री डीएनए, आरएनए और प्रोटीन जैसे अणुओं का अध्ययन करती है। ब्लोटिंग तकनीक वे हैं जो वैज्ञानिक इन प्रकार के अणुओं को अलग करने के लिए उपयोग करते हैं। कोशिकाओं में, वे एक मिश्रण के रूप में मौजूद होते हैं। ब्लॉटिंग शोधकर्ताओं को एक ढेर में सुई की तरह कई के बीच एक प्रोटीन खोजने की अनुमति देता है। ब्लोटिंग आमतौर पर जेल के स्लैब के माध्यम से डीएनए, आरएनए या प्रोटीन के प्रवाह को मिलाकर किया जाता है। यह जेल छोटे अणुओं को बड़े की तुलना में तेजी से आगे बढ़ने की अनुमति देता है। अलग किए गए अणुओं को फिर एक झिल्ली के खिलाफ दबाया जाता है, जो झिल्ली पर जेल से अणुओं को स्थानांतरित करने में मदद करता है। अणु झिल्ली से चिपके रहते हैं, लेकिन एक दूसरे से अलग उसी स्थान पर रहते हैं, जैसे कि वे अभी भी जेल में थे।
पश्चिमी धब्बा
पश्चिमी सोख्ता प्रोटीन को आकार से अलग करने की एक सामान्य तकनीक है, लेकिन सीधे स्तंभों में। ये समानांतर स्तंभ शोधकर्ताओं को विभिन्न नमूनों में एक प्रोटीन की मात्रा की तुलना करने की अनुमति देते हैं जो एक दूसरे के ठीक बगल में चलती हैं, जैसे कि बॉलिंग लेन। उदाहरण के लिए, यदि आप सेल के विकास पर दवा की विभिन्न मात्रा के प्रभाव का परीक्षण कर रहे थे, तो आप चार अलग-अलग समूहों के साथ एक अलग मात्रा में दवा का इलाज करेंगे। तब आप कोशिकाओं को खोल सकते हैं और प्रत्येक समूह के प्रोटीन को एक जेल पर अलग-अलग गलियों में चला सकते हैं। इस तरह से प्रोटीन का प्रसार करना आपको यह देखने की अनुमति देता है कि एक निश्चित प्रोटीन के लिए दवाओं की बढ़ती एकाग्रता क्या है।
उत्तरी धब्बा
उत्तरी सोख्ता का उपयोग आरएनए का पता लगाने के लिए किया जाता है। कोशिकाओं को अपने आरएनए को छोड़ने के लिए खुला तोड़ा जा सकता है। विभिन्न सेल प्रकारों से आरएनए को एक जेल पर अलग-अलग लेन पर चलाया जा सकता है। जेल आकार से भिन्न आरएनए को फैलाता है। आरएनए की ये साफ, समानांतर पंक्तियां एक शोधकर्ता को यह तुलना करने की अनुमति देती हैं कि किस सेल प्रकार में कितना आरएनए है। यह विधि एक शोधकर्ता को यह निर्धारित करने की अनुमति देती है कि क्या एक निश्चित बीमारी से कोशिकाओं में इस आरएनए की अधिक या उस आरएनए की कम है। उत्तरी सोख्ता प्रकट कर सकता है कि आरएनए उत्पादन के स्तर पर एक बीमारी कैसे काम कर रही है।
सदर्न ब्लॉट
दक्षिणी सोख्ता मूल सोख्ता तकनीक है, जिसने नामकरण प्रणाली की शुरुआत की। इसका आविष्कार एडविन सदर्न ने किया था। एक मिश्रण में डीएनए की मात्रा का पता लगाने के लिए दक्षिणी धब्बा का उपयोग किया जाता है। जैसे प्रोटीन और आरएनए के साथ, किसी कोशिका का डीएनए तब छोड़ा जा सकता है, जब वह कोशिका खुली हुई हो। दक्षिणी सोख्ता आकार के आधार पर डीएनए को विभिन्न प्रकार के कोशिकाओं से अलग करता है। प्रत्येक नमूने से डीएनए साफ, समानांतर लेन में फैला हुआ है। एक रेडियोधर्मी या फ्लोरोसेंट जांच का उपयोग करके डीएनए के व्यक्तिगत टुकड़ों का पता लगाया जा सकता है, जो केवल डीएनए के उस टुकड़े को बांधने के लिए डिज़ाइन किया गया है। रेडियोधर्मी जांच से ऊर्जा संकेत, या फ्लोरोसेंट सिग्नल से प्रकाश की चमक, शोधकर्ताओं को बताती है कि प्रत्येक नमूने में डीएनए का कितना टुकड़ा है।
अन्य विस्फोट
तीन मुख्य सोख्ता तकनीक - पश्चिमी, उत्तरी और दक्षिणी - को थोड़ा अलग-अलग अणुओं का पता लगाने के लिए अलग-अलग तरीकों से संशोधित किया गया है। उदाहरण के लिए, दक्षिणी धब्बा बनाम पश्चिमी धब्बा। क्रमशः प्रोटीन और डीएनए का पता लगाता है। प्रत्येक संशोधित तकनीक को आम तौर पर सामान्य तरीके से किया जाता है, लेकिन समानांतर लेन में फैलने वाले अणु का पता लगाने के लिए एक अलग विधि का उपयोग करता है। दक्षिण-पश्चिम के धब्बे डीएनए से चिपके प्रोटीन के अणुओं का पता लगाते हैं। नॉर्थवेस्टर्न ब्लॉट्स आरएनए से चिपके प्रोटीन के अणुओं का पता लगाते हैं। दूरगामी धब्बे अन्य प्रोटीनों से चिपके प्रोटीन के अणुओं का पता लगाते हैं।