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एस्चेरिचिया कोलाई, ई। कोलाई, एक जीवाणु है जो स्तनधारियों की निचली आंतों में बढ़ता है। यह बैक्टीरिया पहली बार 1800 के अंत में खोजा गया था। तब से, यह वैज्ञानिक अनुसंधान में उपयोग का एक लंबा इतिहास रहा है। यह आणविक आनुवंशिकी में सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाने वाला जीव है। ई। कोलाई का कारण आमतौर पर वैज्ञानिक अनुसंधान में प्रयोग किया जाता है कि एक प्रयोगशाला में विकसित करना आसान है। ई। कोलाई को विकसित करने में आसान बनाने वाले कारक इसकी सरल पोषण संबंधी आवश्यकताएं, तेज विकास दर और इसके मध्यम रखरखाव की आवश्यकताएं हैं।
बुन्सेन बर्नर की लौ में रखकर इनोक्युलेटिंग लूप को स्टरलाइज़ करें। लूप के निचले आधे हिस्से को लौ के माध्यम से पास करें जब तक कि यह लाल न हो जाए।
लूप को ठंडा होने दें। आप इसे ठंडा होने के लिए प्लेट पर बाँझ अगर में छू सकते हैं। लूप को मेज पर न रखें या इसे बाँझ आगर या वांछित संस्कृति के अलावा किसी और चीज़ से संपर्क करने दें, अब इसे निष्फल कर दिया गया है।
ई। कोलाई संस्कृति में लूप डुबोएं और फिर इसे हटा दें।
अगर प्लेट को खोलें और धीरे से लूप को आगे और पीछे के एक भाग की सतह पर फैलाएँ। ध्यान रखें कि लूप के साथ अगर के माध्यम से खरोंच न करें। अगर ई कोली को विकसित करने के लिए पोषक तत्व प्रदान करता है।
बन्सन बर्नर लौ में लूप को फिर से बाँझ करने के लिए रखें। एक बार जब लूप रॉड ठंडा हो जाता है, तो इसे ठंडा होने के लिए प्लेट के बाँझ खंड पर स्पर्श करें, फिर दूसरी लकीर बनाने के लिए अपनी पहली लकीर के माध्यम से लूप को विभाजित करें। यह दूसरी लकीर पहली लकीर का एक पतला संस्करण है। इस नसबंदी और ग्लाइडिंग प्रक्रिया को तब तक दोहराएं जब तक कि अग्र प्लेट के कई खंडों को खत्म नहीं किया गया हो। ऐसा करने का कारण आप बाद में सिंगल, क्लोनल कॉलोनियों से चुन सकते हैं। यह सुनिश्चित करने में मदद करेगा कि आपके पास कम से कम एक खंड है जिसमें व्यक्तिगत कालोनियां हैं- बहुत अधिक केंद्रित नहीं (जिसमें बहुत अधिक वृद्धि होगी, और आपको एक ही कॉलोनी से लेने की अनुमति नहीं होगी) और बहुत पतला न हो (जो कोई उपनिवेश नहीं देगा) ।
कार्य क्षेत्र में एक तरफ रखने से पहले पिछली बार लौ में लूप बाँझें।
अगर प्लेट पर शीर्ष वापस रखो। प्लेट को उल्टा घुमाएं और इनक्यूबेटर में 37 डिग्री सेल्सियस (98.6 डिग्री फ़ारेनहाइट) पर सेट करें। यह आदर्श ऊष्मायन तापमान मानव शरीर के तापमान को अनुकरण करता है जहां ई। कोलाई रहता है। 24 से 48 घंटों के भीतर, ई। कोलाई बैक्टीरिया की दृश्य कालोनियां अगर प्लेट में दिखाई देंगी।